De kunststof methode
De kunststof methode heeft veel voordelen ten opzichte van de paraffine methode. De weefsel plakjes zijn veel dunner (0,5-1 micron). De gemiddelde doorsnede van dierlijke cellen is ongeveer 5 micron, dus onder de microscoop kijk je nooit door meerdere cellagen heen! Het oplossend vermogen is hiermee veel groter dan bij paraffinecoupes. Er valt eenvoudigweg veel meer te zien.
Er zijn ook nadelen, de weefselstukjes zijn veel kleiner (gemiddeld 3x3mm) en er zijn slechts een beperkt aantal kleuringen mogelijk. Het snijden van deze blokjes kan alleen gedaan worden op een ultramicrotoom en voor de verdere verwerking zijn moeilijk te verkrijgen prijzige kunststof insluitmiddelen nodig.
Ook dient rekening gehouden te worden met de werkomstandigheden. De juiste luchtvochtigheid en temperatuur zijn essentieel voor een goed resultaat!
De kunststoffen waarmee gewerkt wordt hebben verschillende eigenschappen.
Lijst van diensten
-
Technovit 7100Lijstitem 1
De meest gebruikte kunststof, hier zijn weefseldiktes van 1 micron (1/1000mm)gangbaar. De plakjes worden met een ultrafijn pincet opgepakt en op een objectglaasje met een druppel water gelegd.
-
LR WhiteLijstitem 2
Een veel hardere kunststof, hiermee kunnen dunnere plakjes gesneden worden (gemiddeld 0,5 micron oftewel 500 nanometer). De weefselstukjes dienen dan wel kleiner te zijn. De plakjes schuiven van het mes in een waterbakje. Vandaar worden ze op een objectglaasje met een druppel water gebracht.
-
EponLijstitem 3
Een kunststof waarbij door het samenstellen van verschillende chemicaliën de hardheid zelf ingesteld kan worden. Een zeer bewerkelijk en lastig insluitmiddel.
Reichert UltracutS ultramicrotoom
De stukjes weefsel worden in gelatinecapsules ingegoten waarna deze gesneden kunnen worden op een UltracutS ultramicrotoom.
Hierna kunnen de plakjes worden aangebracht op een schoon objectglaasje en gekleurd worden. Na het kleuren worden de glaasjes gedroogd op een warmteplaat (50ºC).
Vervolgens wordt een druppeltje UV-insluitmiddel aangebracht, voorzien van een dekglaasje en uitgehard met een UV lamp.
Een in kunststof ingegoten stukje weefsel
Diamantmessen
Het weefsel wordt uiterst dun gesneden (0.5-2 mµ).
Dit is alleen mogelijk met diamantmessen en glasmessen. De glasmessen dienen zelf gemaakt te worden met een glasmesbreker. Uit staven kwartsglas worden 3-hoekige glasmessen gebroken.
Met diamantmessen kunnen alleen uiterst kleine stukjes weefsel gesneden worden.
LKB 7800 Glasmesbreker
Een ingespannen glasmes
Het snijden zelf gebeurt geautomatiseerd met de zorgvuldig ingestelde stuurautomaat. Het oppakken van het gesneden weefsel is niet eenvoudig. Na veel vallen en opstaan is een goede methode gevonden.